Doniesiono, że zapalenie układu nerwowego występuje w ośrodkowym układzie nerwowym (OUN) u pacjentów z bólem neuropatycznym, chorobą Alzheimera i zaburzeniami ze spektrum autyzmu. Białko translokatorowe 18 kDa TSPO jest wykorzystywane jako cel obrazowania w pozytonowej tomografii emisyjnej do wykrywania zapalenia nerwów, a jego ekspresja jest skorelowana z aktywacją mikrogleju.
Jednak mechanizm leżący u podstaw regulacji transkrypcji Tspo indukowanej zapaleniem nie jest jasny. Tutaj wykazaliśmy, że ekspresja Tspo indukowana lipopolisacharydem (LPS) była aktywowana przez kompleks AP-1 w linii komórek mikrogleju myszy, BV-2. Powalenie c-Fos i c-Jun, składników AP-1, zmniejszało ekspresję Tspo indukowaną przez LPS. Ponadto wzbogacenie Sp1 w proksymalnym regionie promotora Tspo było zwiększone w obecności LPS. Ponadto wiązanie deacetylazy histonowej 1 (HDAC1) z regionem wzmacniacza, który zawiera miejsce AP-1, zostało zmniejszone przez traktowanie LPS, ale nie było znaczących różnic w HDAC1wiązanie z proksymalnym regionem promotora z LPS lub bez. Wyniki te wskazują, że HDAC1 jest zaangażowany nie w proksymalny region promotora, ale w region wzmacniacza.
Nasze badanie ujawniło, że sygnały zapalne indukują rekrutację AP-1 do regionu wzmacniacza, a Sp1 do proksymalnego regionu promotora genu Tspo oraz że Sp1 może regulować podstawową ekspresję Tspo.
- W tym badaniu wyselekcjonowano unikalny gatunek cytrusów (Citrus australasica) i wstępnie zbadano jego cechy owoców, związki fenolowe oraz zdolność do hamowania stanów zapalnych.
- Owoce limonki paluszkowej wykazywały charakterystyczne cechy kształtu, wielkości, masy, barwy, całkowitej zawartości rozpuszczalnych substancji stałych, pektyn rozpuszczalnych w wodzie, cukrów i kwasów. Łącząc analizę UPLC-HRMS i UPLC-DAD, wstępnie zidentyfikowano i oznaczono 31 związków fenolowych, 1 pochodną sekoirydoidu i 1 glikozyd neolignanowy.
- Skład fenolowy lipy paluszkowej wykazywał specyficzność odmianową i tkankową. Ocena przeciwutleniaczy wykazała, że ekstrakty z odmiany limonki paluszkowej 'XiangBin’ wykazywały lepsze właściwości antyoksydacyjne niż odmiana 'LiSiKe’, zwłaszcza w skórce.
- Model uwalniania NO indukowanego przez LPS przeprowadzono w mysiej linii komórkowej mikrogleju BV-2. Wyniki pokazały, że limonki palcowe hamują uwalnianie NO i cytokiny związane z zapaleniem, w tym podwyższenie poziomu IL-1β, IL-6 i TNFα .
- QRT-PCR ujawnił, że ekstrakty z lipy palcowej łagodziły indukowaną przez LPS regulację w górę iNOS, IL-6, JAK2, TNFα, TLR2, TLR4, IL-1β, NF-κB i indukowaną przez LPS regulację w dół IκBα. Badanie to może poszerzyć naszą wiedzę na temat właściwości fizykochemicznych i bioaktywnych owoców cytrusowych.
W celu ustalenia skutecznej metody separacji polimetoksyflawonów (PMF) i zbadania mechanizmu przeciwzapalnego monomerów PMF, wybrano odmianę cytrusów bogatą w PMF, Ougan ( Citrus reticulata cv. Suavissima ) oraz trzy monomery, w tym nobiletynę , tangeretynę i 5-demetylonobiletynę oczyszczono przez ekstrakcję wspomaganą ultradźwiękami, ekstrakcję do fazy stałej i rozdzielanie metodą szybkiej chromatografii przeciwprądowej.
Do identyfikacji trzech monomerów zastosowano UPLC-MS. UPLC określił czystość 99,87% do nobiletyny, 99,76% do tangeretyny i 98,75% do 5-demetylonobiletyny metodą krzywej standardowej.
Model uwalniania NO indukowanego lipopolisacharydem (LPS) przeprowadzono w mysiej linii komórkowej mikrogleju BV-2. Wyniki pokazały, że monomery PMF hamowały uwalnianie NO i cytokin związanych z zapaleniem, w tym podwyższenie poziomu IL-1β, IL-6 i TNFα. QRT-PCR ujawnił , że PMF łagodziły indukowaną przez LPS regulację w górę poziomu iNOS , IL-6 , JAK2 , TNF α , IL-1β oraz NF- κ B i LPS indukowaną w dół regulację I κ B α , podczas gdy nie wpływały na TLR1 . TLR2 , TLR4 i TLR6 . STAT3 ekspresja była hamowana przez tangeretynę i 5-demetylonobiletynę, ale nie przez nobiletynę.
Test Western blot wykazał również tłumienie ekspresji i fosforylacji JAK2 przez wszystkie trzy monomery PMF, podczas gdy fosforylację STAT3 hamowały tangeretynę i 5-demetylonobiletynę. Mechanizm został zweryfikowany przede wszystkim przez inhibitor JAK2 Ruxolitinib i inhibitor STAT3, Stattic.
Stwardnienie zanikowe boczne (ALS) jest zaburzeniem neurodegeneracyjnym o bardzo szybkim postępie, bez narzędzia diagnostycznego dla fazy przedobjawowej i nadal bez skutecznego leczenia choroby.
Chociaż ALS wpływa na neurony ruchowe, ogólny stan patofizjologiczny wskazuje na pozakomórkowe mechanizmy autonomiczne, w których astrocyty i mikroglej odgrywają kluczową rolę w progresji choroby. Wykazaliśmy już, że IgG z surowic pacjentów z ALS (ALS IgG) indukują przejściowe zmiany wapnia i wzrost ruchliwości kwaśnych pęcherzyków w hodowanych astrocytach szczura.
Mając na uwadze rolę mikrogleju w neurodegeneracji oraz dobrze udokumentowany fakt, że stres oksydacyjny jest jednym z wielu elementów przyczyniających się do choroby, postanowiliśmy zbadać wpływ ALS IgG na aktywację, stres oksydacyjny i system antyoksydacyjny BV- 2 mikrogleju oraz w celu oceny ich ostrego wpływu na nadtlenek cytozolowy, pH i wytwarzanie reaktywnych form tlenu (ROS).
Wszystkie testowane IgG ALS (w porównaniu z kontrolną IgG) wywoływały stres oksydacyjny (wzrost poziomu tlenku azotu i wskaźnika peroksydacji lipidów), a następnie uwalniały TNF-α i zwiększały obronę antyoksydacyjną (podwyższenie dysmutazy nadtlenkowej Mn i CuZn, katalazy i reduktaza glutationowa ze spadkiem peroksydazy glutationowej i glutationu) po 24 h leczenia. Zarówno IgG ALS, jak i kontrolna IgG wykazywały tę samą lokalizację na błonie komórek BV-2 po 24 godzinach traktowania. Nadtlenek cytozolu i zmiany pH zostały ocenione odpowiednio za pomocą sond fluorescencyjnych HyPer i SypHer, mając na uwadze, że HyPer również reaguje na zmiany pH.
293AD Cell Line |
|||
AD-100 | Cell Biolabs | 1 vial | 553.2 EUR |
293AAV Cell Line |
|||
AAV-100 | Cell Biolabs | 1 vial | 609.6 EUR |
293LTV Cell Line |
|||
LTV-100 | Cell Biolabs | 1 vial | 609.6 EUR |
293RTV Cell Line |
|||
RV-100 | Cell Biolabs | 1 vial | 609.6 EUR |
293/GFP Cell Line |
|||
AKR-200 | Cell Biolabs | 1 vial | 686.4 EUR |
T47D/GFP Cell Line |
|||
AKR-208 | Cell Biolabs | 1 vial | 686.4 EUR |
A549/GFP Cell Line |
|||
AKR-209 | Cell Biolabs | 1 vial | 686.4 EUR |
HeLa/GFP Cell Line |
|||
AKR-213 | Cell Biolabs | 1 vial | 686.4 EUR |
293/Cas9 Cell Line |
|||
AKR-5110 | Cell Biolabs | 1 vial | 686.4 EUR |
HeLa/Cas9 Cell Line |
|||
AKR-5111 | Cell Biolabs | 1 vial | 686.4 EUR |
NIH3T3/GFP Cell Line |
|||
AKR-214 | Cell Biolabs | 1 vial | 686.4 EUR |
NIH3T3/Cas9 Cell Line |
|||
AKR-5104 | Cell Biolabs | 1 vial | 686.4 EUR |
MCF-7/Luc Cell Line |
|||
AKR-234 | Cell Biolabs | 1 vial | 686.4 EUR |
SKOV-3/Luc Cell Line |
|||
AKR-232 | Cell Biolabs | 1 vial | 686.4 EUR |
OVCAR-5/RFP Cell Line |
|||
AKR-254 | Cell Biolabs | 1 vial | 686.4 EUR |
Platinum-E Retroviral Packaging Cell Line, Ecotropic |
|||
RV-101 | Cell Biolabs | 1 vial | 1104 EUR |
Platinum-GP Retroviral Packaging Cell Line, Pantropic |
|||
RV-103 | Cell Biolabs | 1 vial | 1104 EUR |
Platinum-A Retroviral Packaging Cell Line, Amphotropic |
|||
RV-102 | Cell Biolabs | 1 vial | 1104 EUR |
Total Protein - Murine Embryonic Stem Cell Line D3 |
|||
CBA-305 | Cell Biolabs | 500 ?g | 414 EUR |
CytoSelect Cell Transformation Assay (Cell Recovery Compatible), Colorimetric |
|||
CBA-135 | Cell Biolabs | 96 assays | 985.2 EUR |
CytoSelect Cell Transformation Assay (Cell Recovery Compatible), Colorimetric |
|||
CBA-135-5 | Cell Biolabs | 5 x 96 assays | 4027.2 EUR |
CytoSelect Cell Transformation Assay (Cell Recovery Compatible), Fluorometric |
|||
CBA-140 | Cell Biolabs | 96 assays | 1027.2 EUR |
CytoSelect Cell Transformation Assay (Cell Recovery Compatible), Fluorometric |
|||
CBA-140-5 | Cell Biolabs | 5 x 96 assays | 4179.6 EUR |
StemTAG Stem Cell Colony Formation Assay (Cell Recovery Compatible) |
|||
CBA-325 | Cell Biolabs | 96 assays | 1027.2 EUR |
StemTAG Stem Cell Colony Formation Assay (Cell Recovery Compatible) |
|||
CBA-325-5 | Cell Biolabs | 5 x 96 assays | 4033.2 EUR |
CytoSelect Cell Transformation Assay (Cell Recovery Compatible), Colorimetric, Trial Size |
|||
CBA-135-T | Cell Biolabs | 24 assays | 518.4 EUR |
CytoSelect 96-Well Cell Transformation Assay (Cell Recovery Compatible, Fluorometric), Trial Size |
|||
CBA-140-T | Cell Biolabs | 24 assays | 547.2 EUR |
Collagen-based Cell Contraction Assay |
|||
CBA-201 | Cell Biolabs | 24 assays | 582 EUR |
CytoSelect MTT Cell Proliferation Assay |
|||
CBA-252 | Cell Biolabs | 960 assays | 490.8 EUR |
Radius 24-Well Cell Migration Assay |
|||
CBA-125 | Cell Biolabs | 24 assays | 602.4 EUR |
Radius 24-Well Cell Migration Assay |
|||
CBA-125-5 | Cell Biolabs | 5 x 24 assays | 2362.8 EUR |
Radius 96-Well Cell Migration Assay |
|||
CBA-126 | Cell Biolabs | 96 assays | 686.4 EUR |
Radius 96-Well Cell Migration Assay |
|||
CBA-126-5 | Cell Biolabs | 5 x 96 assays | 2697.6 EUR |
Radius 384-Well Cell Migration Assay |
|||
CBA-127 | Cell Biolabs | 384 assays | 721.2 EUR |
Radius 384-Well Cell Migration Assay |
|||
CBA-127-5 | Cell Biolabs | 5 x 384 wells | 2802 EUR |
Radius 48-Well Cell Migration Assay |
|||
CBA-5037 | Cell Biolabs | 48 assays | 622.8 EUR |
Radius 48-Well Cell Migration Assay |
|||
CBA-5037-5 | Cell Biolabs | 5 x 48 assays | 2454 EUR |
HIF-1 Alpha Cell Based ELISA Kit |
|||
CBA-281 | Cell Biolabs | 96 assays | 734.4 EUR |
CytoSelect BrdU Cell Proliferation ELISA Kit |
|||
CBA-251 | Cell Biolabs | 96 assays | 637.2 EUR |
CytoSelect 96-well Cell Transformation Assay |
|||
CBA-130 | Cell Biolabs | 96 assays | 866.4 EUR |
CytoSelect 96-well Cell Transformation Assay |
|||
CBA-130-5 | Cell Biolabs | 5 x 96 assays | 3463.2 EUR |
CytoSelect 24-well Cell Invasion, Fluorometric |
|||
CBA-111 | Cell Biolabs | 12 assays | 714 EUR |
CytoSelect 96-well Cell Invasion, Fluorometric |
|||
CBA-112 | Cell Biolabs | 96 assays | 908.4 EUR |
CytoSelect Cell Viability and Cytotoxicity Assay |
|||
CBA-240 | Cell Biolabs | 96 assays | 470.4 EUR |
CytoSelect 24-Well Cell Co-Culture System |
|||
CBA-160 | Cell Biolabs | 24 assays | 525.6 EUR |
CytoSelect 24-Well Cell Co-Culture System |
|||
CBA-160-5 | Cell Biolabs | 5 x 24 assays | 2078.4 EUR |
CytoSelect 48-Well Cell Contraction Assay Kit |
|||
CBA-5021 | Cell Biolabs | 48 assays | 762 EUR |
CytoSelect Cell Proliferation Assay Reagent (Fluorometric) |
|||
CBA-250 | Cell Biolabs | 10 mL | 490.8 EUR |
CytoSelect Cell Proliferation Assay Reagent (Colorimetric) |
|||
CBA-253 | Cell Biolabs | 10 mL | 490.8 EUR |
CytoSelect 24-well Cell Invasion Assay, Colorimetric |
|||
CBA-110 | Cell Biolabs | 12 assays | 714 EUR |
CytoSelect 24-well Laminin Cell Invasion, Colorimetric |
|||
CBA-110-LN | Cell Biolabs | 12 assays | 714 EUR |
CytoSelect 24-well Collagen Cell Invasion, Colorimetric |
|||
CBA-110-COL | Cell Biolabs | 12 assays | 714 EUR |
Radius 24-Well Cell Migration Assay, (Laminin Coated) |
|||
CBA-125-LN | Cell Biolabs | 24 assays | 714 EUR |
CytoSelect 384-well Cell Transformation Assay, Fluorometric |
|||
CBA-145 | Cell Biolabs | 384 assays | 1208.4 EUR |
CytoSelect 384-well Cell Transformation Assay, Fluorometric |
|||
CBA-145-5 | Cell Biolabs | 5 x 384 assays | 4681.2 EUR |
StemTAG PCR Primer Set for Stem Cell Characterization |
|||
CBA-303 | Cell Biolabs | 1 kit | 470.4 EUR |
CytoSelect 96-well Phagocytosis Assay (Red Blood Cell) |
|||
CBA-220 | Cell Biolabs | 96 assays | 762 EUR |
CytoSelect Clonogenic Tumor Cell Isolation Kit (5 preps) |
|||
CBA-155 | Cell Biolabs | 5 preps | 957.6 EUR |
Radius 24-Well Cell Migration Assay, (Fibronectin Coated) |
|||
CBA-125-FN | Cell Biolabs | 24 assays | 714 EUR |
Radius 24-Well Cell Migration Assay, (ECM Array Coated) |
|||
CBA-125-ECM | Cell Biolabs | 24 wells | 838.8 EUR |
CytoSelect Proliferating Cell Nuclear Antigen (PCNA) ELISA Kit |
|||
CBA-254 | Cell Biolabs | 96 assays | 672 EUR |
CytoSelect 48-well Cell Adhesion Assay (Laminin, Colorimetric) |
|||
CBA-056 | Cell Biolabs | 48 assays | 512.4 EUR |
CytoSelect 48-well Cell Adhesion Assay (Laminin, Fluorometric) |
|||
CBA-057 | Cell Biolabs | 48 assays | 553.2 EUR |
CytoSelect 24-well Laminin Cell Invasion Assay, Fluorometric |
|||
CBA-111-LN | Cell Biolabs | 12 assays | 714 EUR |
CytoSelect 96-well Laminin Cell Invasion Assay, Fluorometric |
|||
CBA-112-LN | Cell Biolabs | 96 assays | 908.4 EUR |
Radius 24-Well Cell Migration Assay, (Collagen I Coated) |
|||
CBA-125-COL | Cell Biolabs | 24 assays | 714 EUR |
CytoSelect 24-well Collagen Cell Invasion Assay, Fluorometric |
|||
CBA-111-COL | Cell Biolabs | 12 assays | 714 EUR |
CytoSelect 96-well Collagen Cell Invasion Assay, Fluorometric |
|||
CBA-112-COL | Cell Biolabs | 96 assays | 908.4 EUR |
CytoSelect 48-well Cell Adhesion Assay (Fibrinogen, Colorimetric) |
|||
CBA-058 | Cell Biolabs | 48 assays | 512.4 EUR |
CytoSelect 48-well Cell Adhesion Assay (Fibrinogen, Fluorometric) |
|||
CBA-059 | Cell Biolabs | 48 assays | 553.2 EUR |
CytoSelect 48-well Cell Adhesion Assay (Fibronectin, Colorimetric) |
|||
CBA-050 | Cell Biolabs | 48 assays | 512.4 EUR |
CytoSelect 48-well Cell Adhesion Assay (Fibronectin, Fluorometric) |
|||
CBA-051 | Cell Biolabs | 48 assays | 553.2 EUR |
CytoSelect 24-well Cell Migration Assay (8 ?m), Colorimetric |
|||
CBA-100 | Cell Biolabs | 12 assays | 651.6 EUR |
CytoSelect 24-well Cell Migration Assay (8 ?m), Colorimetric |
|||
CBA-100-5 | Cell Biolabs | 5 x 12 assays | 2745.6 EUR |
CytoSelect 24-well Cell Migration Assay (8 ?m), Fluorometric |
|||
CBA-101 | Cell Biolabs | 12 assays | 664.8 EUR |
CytoSelect 24-well Cell Migration Assay (8 ?m), Fluorometric |
|||
CBA-101-5 | Cell Biolabs | 5 x 12 assays | 2787.6 EUR |
CytoSelect 24-well Cell Migration Assay (5 ?m), Fluorometric |
|||
CBA-102 | Cell Biolabs | 12 assays | 664.8 EUR |
CytoSelect 24-well Cell Migration Assay (5 ?m), Fluorometric |
|||
CBA-102-5 | Cell Biolabs | 5 x 12 assays | 2787.6 EUR |
CytoSelect 24-well Cell Migration Assay (3 ?m), Fluorometric |
|||
CBA-103 | Cell Biolabs | 12 assays | 664.8 EUR |
CytoSelect 24-well Cell Migration Assay (3 ?m), Fluorometric |
|||
CBA-103-5 | Cell Biolabs | 5 x 12 assays | 2787.6 EUR |
CytoSelect 96-well Cell Migration Assay (3 ?m), Fluorometric |
|||
CBA-104 | Cell Biolabs | 96 assays | 762 EUR |
CytoSelect 96-well Cell Migration Assay (3 ?m), Fluorometric |
|||
CBA-104-5 | Cell Biolabs | 5 x 96 assays | 3135.6 EUR |
CytoSelect 96-well Cell Migration Assay (5 ?m), Fluorometric |
|||
CBA-105 | Cell Biolabs | 96 assays | 762 EUR |
CytoSelect 96-well Cell Migration Assay (5 ?m), Fluorometric |
|||
CBA-105-5 | Cell Biolabs | 5 x 96 assays | 3135.6 EUR |
CytoSelect 96-well Cell Migration Assay (8 ?m), Fluorometric |
|||
CBA-106 | Cell Biolabs | 96 assays | 762 EUR |
CytoSelect 96-well Cell Migration Assay (8 ?m), Fluorometric |
|||
CBA-106-5 | Cell Biolabs | 5 x 96 assays | 3135.6 EUR |
CytoSelect 24-well Cell Migration Assay (12 ?m), Colorimetric |
|||
CBA-107 | Cell Biolabs | 12 assays | 664.8 EUR |
CytoSelect 24-well Cell Migration Assay (12 ?m), Fluorometric |
|||
CBA-108 | Cell Biolabs | 12 assays | 679.2 EUR |
CytoSelect 48-well Cell Adhesion Assay (ECM Array, Colorimetric) |
|||
CBA-070 | Cell Biolabs | 48 assays | 699.6 EUR |
CytoSelect 48-well Cell Adhesion Assay (ECM Array, Colorimetric) |
|||
CBA-070-5 | Cell Biolabs | 5 x 48 assays | 2836.8 EUR |
CytoSelect 48-well Cell Adhesion Assay (ECM Array, Fluorometric) |
|||
CBA-071 | Cell Biolabs | 48 assays | 741.6 EUR |
CytoSelect 48-well Cell Adhesion Assay (ECM Array, Fluorometric) |
|||
CBA-071-5 | Cell Biolabs | 5 x 48 assays | 3045.6 EUR |
CytoSelect 48-well Cell Adhesion Assay (Collagen I, Colorimetric) |
|||
CBA-052 | Cell Biolabs | 48 assays | 512.4 EUR |
CytoSelect 48-well Cell Adhesion Assay (Collagen I, Fluorometric) |
|||
CBA-053 | Cell Biolabs | 48 assays | 553.2 EUR |
CytoSelect 48-well Cell Adhesion Assay (Collagen IV, Colorimetric) |
|||
CBA-060 | Cell Biolabs | 48 assays | 512.4 EUR |
CytoSelect 48-well Cell Adhesion Assay (Collagen IV, Fluorometric) |
|||
CBA-061 | Cell Biolabs | 48 assays | 553.2 EUR |
CytoSelect Clonogenic Tumor Cell Isolation Kit (5 x 5 preps) |
|||
CBA-155-5 | Cell Biolabs | 25 preps | 3894 EUR |
CytoSelect 96-Well Hematopoietic Colony Forming Cell Assay (96 assays) |
|||
CBA-320 | Cell Biolabs | 96 assays | 644.4 EUR |
CytoSelect 24-Well Cell Contraction Assay Kit (Floating Matrix Model) |
|||
CBA-5020 | Cell Biolabs | 24 assays | 679.2 EUR |
CytoSelect 24-well Cell Haptotaxis Assay (8 µm), FN-coated, Colorimetric |
|||
CBA-100-FN | Cell Biolabs | 12 assays | 679.2 EUR |
Spośród 11 testowanych IgG od pacjentów z ALS, 4 indukowały powolny wykładniczy wzrost sygnału HyPer, z maksymalną znormalizowaną fluorescencją w zakresie 0,2-0,5, również indukując podobny wzrost intensywności SypHer, ale o niższej amplitudzie. Żadna z kontrolnych IgG nie wywołała zmian z żadnym ze wskaźników. Ostrą generację ROS wykryto w jednej z trzech badanych próbek ALS z karboksy-H2DCFDA. Obserwowane zjawiska wskazują na potencjalną rolę zapalnych czynników humoralnych, IgG, jako potencjalnych wyzwalaczy aktywacji mikrogleju, o których wiadomo, że występują w późniejszych stadiach ALS. Dlatego ujawnienie kaskady sygnałowej ALS IgG w komórkach mikrogleju może stanowić cenny biomarker molekularny i/lub potencjalny cel terapeutyczny.
AffiAB | https://www.AffiAB.com |
AffiASSAY | https://www.AffiASSAY.com |
AffiCHECK | https://www.AffiCHECK.com |
AffiCLONE | https://www.AffiCLONE.com |
AffiCLEAN | https://www.AffiCLEAN.com |
AffiDETECT | https://www.AffiDETECT.com |
AffiDYE | https://www.AffiDYE.com |
AffiELISA Kits | https://www.AffiELISA.com Kits |
AffiEXTRACT | https://www.AffiEXTRACT.com |
AffiNEURO | https://www.AffiNEURO.com |
AffiNGS | https://www.AffiNGS.com |
AffiPCR | https://www.AffiPCR.com |
AffiPREP | https://www.AffiPREP.com |
AffiPURE | https://www.AffiPURE.com |
AffiREC | https://www.AffiREC.com |
AffiSHIELD | https://www.AffiSHIELD.com |
AffiSTAIN | https://www.AffiSTAIN.com |
AffiVET | https://www.AffiVET.com |